！！！特別提示：本試劑盒廣泛征求用戶意見后根據使用關切進行了合理配置，克服了一般試劑盒液體活化HRP不穩定問題，凍干HRP不易溶解和不易進行微量標記等問題，使標記更加方便易操作，且標記量不限下線，讓實驗變得簡單。

                       HRP快速標記試劑盒 產品使用說明書

在您使用本產品前請認真閱讀說明書，這對您順利完成實驗很有幫助。

產品貨號：6210-1MGX5

產品名稱：HRP快速標記試劑盒（每次標記量可以低到0.1mg）

原理與應用：高碘酸鈉氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP）的糖基，經過活化的HRP帶有醛基可以與待標記物的游離氨基結合，發生希夫堿反應（Schiff's base reaction）。本試劑盒適用于帶有游離氨基的物質的標記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的抗體、蛋白或者小分子化合物。本試劑盒采用特有穩定技術，活化HRP保存在液體中，吸取方便，可以較小標記量（可以小到100UG），讓您的標記工作更易把控和操作！

試劑盒組成：

操作步驟：

1.  首先去除待標記抗體或蛋白中的疊氮鈉、以及含有氨基的緩沖成分物質，比如甘氨酸、Tris 等，還有EDTA等物質，可采用透析和超濾的辦法置換緩沖液，以去除干擾物質達到較好標記效果！透析或超濾緩沖液盡量選擇0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說明書附件有經驗配方無需調整PH），若實驗室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超濾置換緩沖液，結束后調整抗體或蛋白的濃度到2MG/ML。如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質可以直接用上述PBS或CB緩沖液調整濃度到2MG/ML備用。

2.  從4℃取出HRP標記試劑盒，使各組分充分混勻。

3. 取500ul抗體或蛋白（約1mg），加入100ul預活化HRP(1mg)液體中，用移液槍反復吹打幾次混勻，混勻后加入HRP標記啟動液108ul（加入啟動液量依據：每10ul蛋白和HRP混合液加1.8ul啟動液）繼續混勻數次，避免產生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯反應2-3小時，若遇快要下班也可放4℃反應24小時左右（此法效果一樣或者更好不必擔心）。

4. 偶聯結束將反應終止液粉管中加入1mL去離子水混勻，取50ul加入3所述反應液中（加入終止液量依據：每1mg HRP加入終止液50ul），充分混勻，室溫放置1 小時或者4℃ 2小時。

5. 終止完成后，可直接加入等體積的標記物保存液，充分混勻，置于-20℃保存。如果想更上長期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0（說明書附件有經驗配方）透析或超濾置換緩沖液后再加標記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長。

注意事項：

1、待標記物緩沖液成分過于復雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。

2、如果待標記物不是抗體是其它蛋白，那么請根據分子量參考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建議1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建議1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建議1mg蛋白使用4mg HRP；此時啟動液和終止液請按步驟3和4描述標準適量加入；如果標記量為小于1mg的抗體或蛋白（可以小到0.1mg），HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。

3、小分子藥物不建議直接標記HRP，因為HRP的結構不能結合足夠的藥物會造成效價偏低，這種情況建議先偶聯BSA增加小分子偶聯量再進行HRP標記，這樣效果會非常好。

4、如果待標記物含有其它蛋白需要把無關蛋白同樣計算進去，盡快如此也請您慎重選擇這樣的樣品進行標記。

5、本試劑盒保存4℃可以保證1年內開啟有效，活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質。

6、終止液干粉一共5支，原則上每一支配好后僅限一次性使用，因此您可以根據您的實驗總量合理配制使用。

附件：

1、0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用調節PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制：取NaH2PO4.2H2O，5.35g和Na2HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，末了添加NaOH，0.35g再次混勻后即可，不用再調節PH。

                        HRP快速標記試劑盒 產品使用說明書

在您使用本產品前請認真閱讀說明書，這對您順利完成實驗很有幫助。

產品貨號：6210-0.5MGX2

產品名稱：HRP快速標記試劑盒（每次標記量可以低到0.1mg）

原理與應用：高碘酸鈉氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP）的糖基，經過活化的HRP帶有醛基可以與待標記物的游離氨基結合，發生希夫堿反應（Schiff's base reaction）。本試劑盒適用于帶有游離氨基的物質的標記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的抗體、蛋白或者小分子化合物。本試劑盒采用特有穩定技術，活化HRP保存在液體中，吸取方便，小到可以標記100ug，讓您的標記工作更易把控和操作！

試劑盒組成：

操作步驟：

1.  首先去除待標記抗體或蛋白中的疊氮鈉、以及含有氨基的緩沖成分物質，比如甘氨酸、Tris 等，還有EDTA等物質，可采用透析和超濾的辦法置換緩沖液，以去除干擾物質達到較好標記效果！透析或超濾緩沖液盡量選擇0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說明書附件有經驗配方無需調整PH），若實驗室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超濾置換緩沖液，結束后調整抗體或蛋白的濃度到2MG/ML。如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質可以直接用上述PBS或CB緩沖液調整濃度到2MG/ML備用。

2.  從4℃取出HRP標記試劑盒，使各組分充分混勻。

3. 取250ul抗體或蛋白（約0.5mg），加入50ul預活化HRP(0.5mg)液體中，用移液槍反復吹打幾次混勻，混勻后加入HRP標記啟動液54ul（加入啟動液量依據：每10ul蛋白和HRP混合液加1.8ul啟動液）繼續混勻數次，避免產生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯反應2-3小時，若遇快要下班也可放4℃反應24小時左右（此法效果一樣或者更好不必擔心）。

4. 偶聯結束將反應終止液粉管中加入1mL去離子水混勻，取25ul加入3所述反應液中（加入終止液量依據：每1mg HRP加入終止液50ul），充分混勻，室溫放置1 小時或者4℃ 2小時。

5. 終止完成后，可直接加入等體積的標記物保存液，充分混勻，置于-20℃保存。如果想更上長期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0（說明書附件有經驗配方）透析或超濾置換緩沖液后再加標記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長。

注意事項：

1、待標記物緩沖液成分過于復雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。

2、如果待標記物不是抗體是其它蛋白，那么請根據分子量參考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建議1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建議1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建議1mg蛋白使用4mg HRP；此時啟動液和終止液請按步驟3和4描述標準適量加入；如果標記量為小于0.5mg的抗體或蛋白（比如0.1mg），HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。

3、小分子藥物不建議直接標記HRP，因為HRP的結構不能結合足夠的藥物會造成效價偏低，這種情況建議先偶聯BSA增加小分子偶聯量再進行HRP標記，這樣效果會非常好。

4、如果待標記物含有其它蛋白需要把無關蛋白同樣計算進去，盡快如此也請您慎重選擇這樣的樣品進行標記。

5、本試劑盒保存4℃可以保證1年內開啟有效，活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質。

6、終止液干粉一共2支，原則上每一支配好后僅限一次性使用，因此您可以根據您的實驗總量合理配制使用。

附件：

1、0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用調節PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制：取NaH2PO4.2H2O，5.35g和Na2HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，末了添加NaOH，0.35g再次混勻后即可，不用再調節PH。